| 人胰岛素样生长因子—Ⅰ基因农杆菌工程菌株的构建 |
| 周鹏[1] 王跃进[2] 等 |
| 关键词：胰岛素样生长因子－1 化学合成 植物表达载体 重组农杆菌 药用植物 |
| 主要内容：采用固相亚磷酸三酯法人工化学合成了人胰岛素样生长因子-I(huIGF-1)基因的4条寡核苷酸片段，再通过片段1，2与3，4末端互补配对和Klenow酶促补平及酶切连接成为完整的huIFG-I DNA片段，用EcoR I/Pst I酶切后克隆于pGEM T-Easy Vector，经测序证明所得DNA序列与设计的序列完全一致，选用植物偏爱密码子校正了启始密码子ATG下游的6个密码子，并在ATG处增加Kozak序列后，插入pBI121的BamH1/SacI位点，构建了以35S为启动子的植物表达载体，以Hind II/EcoR1切下35S－Kozak-IGF-I-NOS(ter)。插入pCAMBIA2300之Hind III/EcoRI位点，构建成huIGF-1植物表达载体，通过CaCl2直接转化法将表达载体导入农杆菌EHA105（Rif.)，并以菌落原位杂交技术和DNA dot blot对重组农杆菌进行了筛选，所获得的重组农杆菌菌 培养huIGF-I药用植物奠定地基础。 |
| 《西北农林科技大学学报》 2001,29(3).-19-23 |
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