| 本发明涉及一种通过光学显微镜对样品(36)进行高分辨率成像的方法, 在该方法中,样品(36)的目标区域(34)由第一照明光束(24a)照明, 25a)在第一保持持续时间期间,以便将样品(36)中的荧光团的至少第一子集从第一状态(Z1)转移到第二状态(Z2), 当从第二状态(Z2)转变回第一状态(Z1)时,所述第一子集的荧光孔发射荧光光子,所述荧光光子用于产生第一原始图像。 样品(36)的目标区域(34)由第二照明光束(24b)照明, 25b), 其功率不同于第一照明光束(24a)的功率, 和/或具有与第一照明光束(24a)的光束轮廓不同的光束轮廓, 25a), 在第二保持时间期间,为了将样品(36)中荧光团的至少第二子集从第一状态(Z1)转移到第二状态(Z2), 所述荧光团的第二子集在从第二状态(Z2)转变回第一状态(Z1)时发射荧光光子,所述荧光光子用于产生第二原始图像。 从第一原始图像和第二原始图像产生样品(36)的高分辨率图像。 第一保持持续时间和第二保持持续时间短于荧光团的第三状态(Z3)的寿命, 借助第一照射光束(24a)照射样品(36)的目标区域(34),荧光团的第三子集被转移到其中, 和/或第二照明光束(24b,25b),其寿命比第二状态(Z2)的寿命长至少2倍。 |