| 一种快速评价引导编辑系统工作效率的方法 |
| CN202310310244.9 2023-3-24 发明申请 |
| 2023-7-21 |
| 本申请提出了一种快速评价引导编辑系统工作效率的方法，涉及生物技术领域。针对目标基因设计特异性的打靶位点，构建引导编辑系统的载体，载体中包含过表达目标基因的载体随后转染细胞系，其中构建的载体上带有能够被流式细胞仪识别检测的荧光标记；对培养后的转染细胞提取DNA；针对打靶位点侧翼序列设计特异性引物，使得PCR扩增序列覆盖打靶位点，随后进行PCR扩增，获得细胞PCR扩增产物；将获得的PCR产物置于测序仪上进行高通量测序，获得编辑效率并鉴定编辑类型。在原有的基础上增加了体外过表达相关基因的载体，同时共转目标pegRNA和编辑酶，在细胞水平直接鉴定切割效率，节省了成本，灵敏度和精确度高。 |
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