| 人脑内皮细胞和生长培养基以及扩增原始CD34+CD38-骨髓干细胞方法 |
| US10628886 2003-7-29 发明申请 |
| 2011-4-21 |
| 采用人脑内皮细胞(HUBEC)共培养促进人CD34+CD38？ 公开了与PMVEC系统一致的小区。 从尸体供体中分离HUBEC，原代传代，克隆，发现von Willebrand因子阳性。 纯化的骨髓CD34+细胞在含GM-CSF+IL-3+IL-6+SCF+Flt-3配体的HUBEC单层上培养，细胞总数增加14.5倍，CD34+细胞增加6.6倍，最显著的是CD34+CD38+细胞增加440倍。 7天后。 此外，CFU-GM产量增加了15.1倍，BFU-E增加了8倍，CFU-mix增加了5.2倍。 最佳世代取决于外源性供应的细胞因子的持续存在。 相比之下，相同处理的无基质悬浮培养物支持细胞总数增加10.2倍，CD34+细胞增加3倍，并维持CD34+CD38？ 培养7天后细胞集落形成。 此外，我们还发现，来自同一供体的非脑内皮细胞既不支持人CD34+CD38+细胞的扩增，也不支持人CD34+CD38+细胞的维持。 牢房。 尽管很少有稳态CD34+CD38？ 在甲基纤维素培养液中，细胞产生可见的集落形成细胞，我们的基于流式细胞仪的细胞周期和分类实验显示高克隆性的CD34+CD38？ 细胞因子处理的HUBEC体外培养中的群体(24%克隆效率)。 提示骨髓CD34+CD38？ 细胞需要间质细胞微环境进行最佳扩增，体外扩增的CD34+CD38？ 在HUBEC培养系统中产生的细胞似乎保留了某种程度的原始“茎”。 |
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