| ?干细胞的方法和技术，竖直突起 |
| CA2610324 2007-12-17 发明申请 |
| 2009-6-17 |
| ?我们计划结合(除了其它的之外)使用转录因子Oct-4，Nanog和Sox2抑制基因保持我们的干细胞库存(增殖策略)和从分化和细胞表面包括ssea3糖脂抗原和ssea4和硫酸角质素抗原tra-1-60和tra-1-81，所有的上述保持干细胞在它们的干细胞形成(从分化)的多能性。我们还可加入端粒酶。我们加入到该过程中，癌基因c-myc，特别是如果细胞集落启动分化，目的是反分化细胞的多能性状态。然后我们设置介质我们考虑几个在一起的替代品或组合(甚至所有的)。1)体外发育(例如。人造子宫和输卵管细胞)的茎还为介质。2)缓慢轻轻抽氟碳化合物(供氧量)及营养成分，葡萄糖(我们可以合成氨基酸)，如羊水中发现的那些。我们不需要来与丙氨酸的最佳配方，精氨酸，天冬氨酸，异亮氨酸，半胱氨酸，谷氨酸+谷氨酰胺，甘氨酸，亮氨酸，赖氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，脯氨酸，牛磺酸，苏氨酸，丝氨酸，缬氨酸(和可能的酪氨酸)和在流注和流量，包括流动冲刷浪费。另外我们需要加入NaHCO3和可能抗生素(我们可能从鸡乳化蛋黄等，还无机盐如Na+，K+，Ca2+，Cu2+，Zn2+，Co2+)以及维生素。由(3)其它介质的热失活的可能导致胎儿，肝，脾)牛(血清白蛋白)，羔羊，猪，2-巯基乙醇，……，4)中制得的介质包括Dulbecco‘s(Gibco，Eagle)，碳酸氢盐介质的Krebs-Ringer以及葡萄糖，乳酸盐，和丙酮酸，巧克力琼脂，-SFM的JRH5)，我们也加入Wnt(可能微注入核被膜)，白血病抑制因子(LIF)，STAT3，fiberoblast生长因子(bFGF或FGF-2)，人choronic促性腺素激动剂的利普安(GnRH)(肽激素)，paracine作用因子，干细胞因子(SCF)砌块(以建立C受体)的试剂盒和mRNA增加成功功能，还细胞因子G-CSF和GM-CSF。我们也可以加入肝素结合生长因子(例如。hbgf-1和hgbf-2)。6)其它介质包括的JRH Biosciences“Excel620无血清的介质(的JRH-(SFM)洗涤。(用于进一步细胞传代增殖干细胞)accutase(创新性的细胞Technologies Inc。，由丙烯酰胺)和捣碎分布的大约10倍用移液枪。然后，细胞悬液进行温育。在120RCF解离的细胞进行离心，重新悬浮，等分试样中通过台盼蓝排除测定法计数血细胞，以确定量的活细胞。细胞(105)接种在T75用于长期传代培养瓶(培养基(涂覆有纤维连接蛋白/lanmine)每瓶)中。所有媒体包含1-谷氨酰胺，青霉素/链霉素，肝素(Sigma)，bFGF(R&D Systems)，和EGF(R&D Systems)。10总共4细胞/孔种于12孔板中，体积为1ml在标准条件下生长。生长几天后的干细胞进行计数并通过accutase解离，活细胞通过台盼蓝排除测定法计数在血细胞计数器来测定。除了取代对男性女性的体细胞DNA……下方的卵母细胞的细胞核我们可以看到干细胞从母鸡蛋可如下获得 : 1)治疗癌基因c-myc的蛋。2)超排卵(育性药物)3)收获使用的鸡蛋。4)成熟cmrl-1066它们在介质(Sigma)，FCS(Hyclone)，孕马血清(Sigma)，人chrionic促性腺激素(Sigma)，青霉素，链霉素。5)中的卵孵化的CO2，inonomycin，然后在6-dimethyllaminopurine。6)干细胞，然后除去，进一步类似媒体的上方介质(干细胞组织培养-尤其增殖；我们可以治疗之前，患者由于我们需要相当大的兼容干细胞的库存第一)。7)我们可以利用触电，热休克得到干细胞开始分裂。8)我们也可以使用上述成熟周期和孵育增殖，通过传统方法产生的干细胞(例如卵母细胞去除核，微米；激光；电冲击和与体细胞DNA)更换。9)或者我们可以使用原始生殖细胞从成年男性和使用上述成熟周期和培养增殖干细胞。10)另一选择是使用一批干细胞(来自任何上述方法中的)具有停止增殖和治疗与成熟周期，然后再次孵育跳转开始增殖周期。11)或我们可以利用一批干细胞(来自任何上述方法)和microinject，激光触电的DNA从干细胞(杜绝了增殖的)成新鲜卵母细胞(与核去除)。12)我们也可以替代10)和11)之间或测试一个是最丰富的并能一个用于保持最好从突变的DNA的完整性或退化。我们寻找开发一种可调fMRI或MRI(述显示板相匹配的锐度/详细地说明，因为增加了放大倍数)-电子显微镜(能跟踪的运动跟踪器)和可能更重要，以及fMRI或MRI和/或PET还一种微小探头，透镜类似于视频(实时)由外科医生使用的探针穿过血流，除将(例如我们的视频探头，带有光纤可能或金刚石透镜由于体积小的透镜，我们需要一种不会变脆的透镜在尺寸)细胞水平。它将进入细胞通过扎膜针和能够探头的内部四周细胞(我们也可以使细胞与凝胶环绕探针不泄漏)。用于视频探头的目的是观察细胞内部的颜色和进行染料污phospherousent(荧光)。我们在我们的探针可以包括红外能力。我们使用染料和染剂在输入，例如癌基因c-myc，不同的化学品，不同的酶，不同，生长因子，不同的氨基酸，还葡萄糖和氧气，二氧化碳和不同级别的废弃物中的所有不同量(盐)以及由于所有介质，包括熟化介质，孵化介质，传代介质，和体外发育介质。我们观察到，这些穿过细胞膜的 : 1)通过渗透(疏水性的亲水亲油性过程)何种程度的有机盐浓度都是最佳的细胞的健康和它们的能力携带其他的输入作为它们通过细胞膜的上方。2)蛋白受体蛋白受体的结合，其输入和如何(机构)工作，给我们带来这些受体的输入在并输送到正确的用户。3)为什么的蛋白受体(二肽)选择特定的输入。4)我们可以观看细胞器(内部结构-还DNA化学品的进，出口进入和退出核被膜和能力的核苷酸一种如何感觉反馈的释放，化学品和EG细胞器的部分反应。mRNA核苷酸进行指令激活和停用细胞分裂之前一致，并且当去激活细胞停止增殖的)以改变尺寸，形状(用于实时观察可能脉动活性的)或其它指示器和位置在各种时间中的远景(什么早期EG。力矩的力矩，细胞质中的什么方便最佳增殖对晚期增殖，发明的增殖与生长减缓甚至因素，以及什么原因是细胞EG组成。该细胞器响应-反应对减缓晚期增殖)实时(或视频录像)作为活性的指示特殊细胞器或需要一个以上的垂直链式细胞器的放置输入可用的形式-1。为输出从细胞器“一种新形式的输入在使用？2。其中该输出要使用的？3。怎样得到有？4。重要的是其贡献的预定部分的细胞的方法和如何它用于EG。信号激活或去激活的核苷酸，5。如果你所发生的浓度增加的输入细胞外膜，细胞内膜，在核被膜。5)我们使用phospherousent(荧光)彩色染色/染色的一个或组合输入观察它们如何被递送到，细胞器，由所述量的消耗速率输送到入口点(S)的细胞器及其变化浓度(以及染料/污渍吸收-下出现的彩色视频探头)从高到低。我们可以注意输出点(S)的使用形态，数量，每根输入guesstimate/吸收的生物外推和反向工程的消耗/催化剂/使用(例如。通信并指示/送方向通过DNA；端粒酶变化的原因/如何/如何防止和如何维修；RNA维修等，生长，增殖，休眠，分化)。6)催化剂(酶)内的细胞器过程产生的特定输入和哪些输出的。7)，其输出被用于由其他部件的细胞(如何它们的递送系统运行时)。8)设有一个以上的垂直链(一)的方法。9)有多个处理的导管(如果存在层吸收和处理；重要的是它们的功能)。10)不同的细胞器形状怎样使用于和达尔文演化的存活率。11)有多个腔室以一些的细胞器，该存储容量或其不同的处理功能。12)怎样细胞知道如何移动，其输入和它们进一步加工产品的摄取其中，它们将处理的地方使用/消耗。13)我们想要学习的水平级别和类型的细胞器制备的处理输出和消耗例如，当信令继续干细胞增殖或增殖速率慢的(即，休眠细胞活性)。14)相对例如，当输入的吸收容量/速率信令干细胞的继续增殖或缓慢速率的增殖(即，休眠细胞活性)。15)有什么作用作重力要做的位置(和尺寸，形状和细胞器和核增殖速率)的(任何和所有这些因素如何影响功能0.5%)特别是3-三维布局。还内的流体水平的浓度。16)我们相信细胞分裂/增殖是基于一定的条件下在细胞质中，体细胞由于/成人DNA注入卵母细胞(具有其自身的核去除的)代替所述卵母细胞/蛋自身核提供内部的情况(与少量帮助从电休克)使体细胞DNA将卵母细胞。研究这些机构(我们将看起来还在部分DNA，基因，核苷酸，播放(反应的反馈信号)在增殖过程，以及我们计划学习功能的核糖体(例如。促进与转录)，囊泡，糙面内质网，高尔基体，细胞骨架，光滑内质网，线粒体，液泡，细胞溶胶，溶酶体，并且扩增中心粒。17)我们计划使用显微fMRI和MRI和PET和微列车实时视频探头激活和去激活的定时的基因，可工作在unionson，例如，所有需要的基因(引起增殖的启动，继续，还以避免停止)激活或可能级联(一个基因激活引起了另一个基因激活)或可能的是相关基因的激活在垂直链，consequitively。还设置有作用的基因及其相互作用如反应或通过激活或促进的新鲜卵母细胞的细胞质中和/或在细胞质内的细胞器。18)我们也可以使用微型视频探头和微fMRI和/或MRI观察phospherousent(荧光)，观察物质的摄入量和释放/排出，流入和流出的核被膜和它们的作用在DNA(当特定物质已经进入核被膜和变化造成在DNA和DNA的输出(例如。信号对废)效应的影响其他部分的细胞细胞器，细胞质组合物(例如，增殖)。19)和为18)和19)的进一步研究，我们可以分离的DNA串(与微fMRI和微MRI和/或微型宠物视频探头)，取物质的输入视频流(例如Wnt或生长因子或癌基因c-myc)它们进入，核被膜(它们如何被移动到特定含或另一种方式)他们为什么做激活一些含和不他人一段时间后(许多的增殖和原因)，同样的物质不会引起输入(可能造成的)场景相同基因激活(例如。继续增殖)或细胞质(甚至隔离特定细胞器)不再响应所述基因相同的方式(增殖停止)中。20)我们可以即使使用微fMRI和MRI和视频探头和宠物观察反应(引起的通过添加物质输入)，甚至解剖DNA串(在细胞或细胞核内的膜)不同的时间点(短期)之前，阶段期间，反应后的物质输入曝光于该DNA，敷设DNA(或甚至可能是利用面部识别技术含跟踪的螺旋DNA的串在该电池和核膜)笔直/平直，和含记录，改变它们特性(所谓的自然(含特性差异)是当相激活和去激活)是过程，催化剂(Chemicals)是什么类型的需要，一种含有差异的方式从另一催化(普通对不同输入)激活或去激活，为一种物质引起的催化过程从输入到另一不同的在与反应基因进行不同尽管方法让压相似表型(例如增加增殖)。21)还通过逆向工程的基因已经被失活或活化用微fMRI，MRI和PET和视频探测器(最多比较基因的活性增殖时间)，看如何输入物质作用，这些基因，以及它们如何基因直接/指示细胞器和/或RNA，保持指示和重新开始进行增殖过程和观察全部的方式在长期直到增殖具有停止。通过观察特性的变化的特定相关nucleuotides(和在最具活性的增殖量对它们不同在增殖)端。22)我们需要能够理解什么改变了因为最佳的增殖，直到增殖具有停止。可以其基因反应，Chemicals(1)指示的电池外侧被摄取到区域负责细胞增殖或停止增殖其过程是dicussed以上或2)在细胞质中)，例如浪费，缺少氧气，饥饿…甚至端粒酶和生长因子，不一种有效地似乎可行的，可直接注入Wnt成核被膜的情况下，这样的因素不被摄取，或3)可以将质组合物或细胞器其降解，失去响应性或自然计数老化因子(如内部时钟Gp)(目前未知Science)影响该基因或4)的其它基因(活化的其它输入物质)块生殖基因/含。23)我们将使用微型fMRI和MRI和微视频探头和宠物跟踪电池份；DNA(在其天然环境中还可以去掉该解剖的同时，仍然新鲜加入这种物质作为WNT观察其反应)，细胞器和细胞质(以及样品的酶和化学物质的产生并添加…)观察相互作用，所有这些因素确定的功能。使这些尖锐的观察结果我们的目的跟踪这些因素的条件差异而在1。最佳的小区，并且，当增殖的2。干细胞停止增殖，并且因子的条件3。体细胞的因子4的条件。卵母细胞。可观察的条件在我们寻找的物理特性。因为大多数细胞功能调节的DNA，我们寻找天然活化和/或失活和方式使我们我们这样做可以跟踪定时(动作(例如，化学/酶。。。含一个以上的反应激活在同一时间，或一个激活另一个或一个以上的要求被激活的同时，实时)通过使用(专用)含级联的微跟踪视频镜头对经矫直的质量训练(laidout)DNA串的4。细胞类型的上方，其增殖的表型，我们确定，但没有已知的做法机构。 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