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| 对虾白斑综合症病毒vp15基因的RNA干扰研究 |
| 作者：张衡 谷力 杨丰； 出处：台湾海峡. 2012,31(1).-47-52 |
| 关键词：海洋生物学；对虾白斑综合症；DNA结合蛋白；vpl5基因；RNA干扰 |
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| 文章摘要：VPl5是对虾白斑综合症病毒（WSSV）的一种核衣壳蛋白，以往的研究表明VPl5属DNA结合蛋白，具有潜在的浓缩包装病毒基因组的功能．利用RNAi技术将vpl5基因沉默，来研究vpl5基因沉默后对WSSV增殖及结构的影响．体外合成了vpl5基因的特异双链RNA（vpl5-dsRNA）和非特异双链RNA（gfp-dsRNA），分别与WSSV混合共注射淡水原克氏螯虾．在感染后24、36、48h，每个实验组分别取病虾步足肌肉，样品用Trizol试剂盒提取RNA用于RT-PCR检测、用病毒检测试剂盒提取DNA模板用于荧光定量PCR分析．另外每组随机选取1只虾，取中肠，用于树脂包埋组织超薄切片分析．逆转录PCR分析结果显示vpl5-dsRNA能特异性敲除vpl5基因转录表达，实时荧光定量PCR分析结果显示vpl5-dsRNA干扰vpl5基因的表达能有效抑制WSSV病毒粒子的增值．此外，利用树脂包埋组织超薄切片电子显微镜技术观察发现vpl5基因被干扰后病毒粒子数量上明显降低并且引起病毒粒子包装异常．通过vpl5基因特异dsRNA干扰，有效抑制了WSSV病毒增殖，此外进一步阐明VPl5蛋白的功能及其在病毒组装方面的重要作用，对进一步了解病毒组装以及病毒防治具有重要的意义． |
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