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一种适冷性海洋酵母BohaiSea-9145低温碱性脂肪酶基因、氨基酸序列及重组脂肪酶

发明专利

申请专利号：201110314848.8

申请日期：2011.10.17

公开公告号：CN102363786A

公开公告日：2012.02.29

主分类号：

分类号：

国际申请：

国际公布：

申请人：中国水产科学研究院黄海水产研究所

地址：266071山东省青岛市南京路106号

发明设计人：孙谧盛军王跃军刘均忠郝建华

内容摘要：本发明涉及从渤海海泥中筛选到的一株能够分泌低温碱性脂肪酶的适冷性海洋酵母菌株 (BohaiSea-9145)中,利用简并引物聚合酶链式反应(PCR)与cDNA末端快速扩增(RACE)相结合的方法克隆得到了一条编码低温碱性脂肪酶 (LipY)的基因。该基因含有一个1206bp的开放阅读框(ORF),编码401个氨基酸,在氨基端含有一个28个氨基酸的信号肽。编码的氨基酸含有脂肪酶的保守序列(G-X-S-X-G)和1个潜在的N-糖基化位点。将此脂肪酶基因克隆到真核表达载体 (pIC9K)上,在巴斯德毕赤酵母(GS115)中进行异源表达。以甲醇作为诱导剂,发酵96小时后在上清液中获得了高活力的重组脂肪酶。利用镍离子亲和柱对重组脂肪酶进行纯化,得到了电泳纯的脂肪酶样品。该重组脂肪酶具有低温催化活力高、碱性条件下性能稳定等一系列优点,在日化纺织及食品加工等低温催化领域有着广阔的应用前景。

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